干細胞培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的核心成分,其作用是為干細胞提供必要的營養(yǎng)、生長因子、pH緩沖和無菌環(huán)境,以維持細胞的存活、增殖和分化。
提供基礎營養(yǎng):
氨基酸、糖類、維生素:為細胞代謝提供能量和原料。
無機鹽:維持滲透壓和離子平衡。
支持細胞生長與增殖:
血清(如FBS胎牛血清):提供生長因子、激素、脂蛋白等,促進細胞貼壁和增殖。
重組生長因子:誘導干細胞自我更新,抑制分化。
維持pH穩(wěn)定:
通過緩沖系統(tǒng)中和代謝產(chǎn)生的酸性物質,保持培養(yǎng)基pH在7.2~7.4范圍內。
防止污染:
添加抗生素預防細菌污染(注意:長期使用可能影響細胞狀態(tài))。
培養(yǎng)基本身需無菌,通常經(jīng)過過濾除菌。
調節(jié)滲透壓:
通過電解質濃度控制滲透壓,避免細胞因滲透壓失衡而破裂或皺縮。
支持特定細胞需求:
根據(jù)干細胞類型(如胚胎干細胞、間充質干細胞、神經(jīng)干細胞)添加特異性成分。
二、干細胞培養(yǎng)基存放要求:
1. 未開封培養(yǎng)基的存放
低溫保存:
基礎培養(yǎng)基應存放于4℃冰箱,避免反復凍融。
添加血清或生長因子后的培養(yǎng)基需根據(jù)成分調整:
含血清的培養(yǎng)基:短期可存于4℃,長期(>1周)需-20℃冷凍,使用前解凍。
無血清培養(yǎng)基:建議小量分裝,4℃保存(部分需-20℃)。
避光保存:
某些成分(如谷氨酰胺、生長因子)對光照敏感,需用錫箔紙包裹或存放在深色容器中。
保質期限制:
基礎培養(yǎng)基開封后建議1個月內用完,含血清的培養(yǎng)基最好2周內使用。
2. 配制后培養(yǎng)基的存放
無菌操作:
配制時在超凈臺內完成,避免微生物污染。
分裝至無菌容器(如培養(yǎng)瓶、離心管),密封后標記配制日期。
短期存放:
4℃保存,不超過1周(含血清培養(yǎng)基)。
無血清培養(yǎng)基可存于4℃或按說明書要求冷凍。
長期存放:
冷凍,使用前需緩慢解凍。
3. 特殊注意事項
避免反復凍融:
凍融會導致血清蛋白變性、生長因子失活,建議分裝成單次用量后冷凍。
禁止陽光直射:
存放位置遠離窗戶或強光,防止光敏成分降解。
定期檢查:
觀察培養(yǎng)基是否渾濁、沉淀或變色,若出現(xiàn)異常則丟棄。
